實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號(hào) |
急性髓性白血病細(xì)胞；KG-1a | 貼壁生長 | EY-X63456 |
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細(xì)胞名稱 急性髓性白血病細(xì)胞；KG-1a
形態(tài)特性: 骨髓瘤細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性:
培養(yǎng)條件: IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium新生牛血清，20%
傳代方法: 2x10-5細(xì)胞/ml
傳代情況:
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
rpIFN-g (50 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；PA317 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)胎牛血清，10%
rpIFN-a (100000 UN)細(xì)胞名稱: 小鼠結(jié)締組織L細(xì)胞株929克隆；L-929[L929] MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)馬血清，10%
rPhos TrkA Cell-Based ELISA (1 KT)細(xì)胞名稱: 小鼠B淋巴細(xì)胞；WEHI231 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；0.05mMβ-巰基乙醇
rPhos TH Aff Pur PAb (100 UL)細(xì)胞名稱: 小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14；MC3T3-E1Subclone14 α－MEM：AlphaMinimumEssentialMedium(withNucleosides)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
rphHeparinase III, CF (10 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠顱蓋成纖維細(xì)胞；OP9 α－MEM：AlphaMinimumEssentialMedium(withNucleosides)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，20%
rphHeparinase II, CF細(xì)胞名稱: 小鼠胚胎干細(xì)胞；ES-D3(CRL-1934) 干細(xì)胞培養(yǎng)基
rpGM-CSF, CF (10 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞；Y1 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
rpGM-CSF (10 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；C3H/10T1/2,Clone8 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
rpEndoglin, CF (25 UG)細(xì)胞名稱: SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞；COS-1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS
rPDGF-AA MAb (Cl 184805) (500 UG)細(xì)胞名稱: 牛胚氣管細(xì)胞；EBTr(NBL-4) MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)胎牛血清，10%
rPDGF-AA Biot Aff Pur PAb (50 UG)細(xì)胞名稱: 恒河猴腎細(xì)胞；LLC-MK2 RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
rPDGF-AA Aff Pur PAb (100 UG)細(xì)胞名稱: 牛腎細(xì)胞；MDBK RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
rpCD31 (PECAM-1), CF (50 UG)細(xì)胞名稱: EB病轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴細(xì)胞；B95-8 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清，10%
rPBEF Aff Pur PAb細(xì)胞名稱: 非洲綠猴腎細(xì)胞；VERO MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)胎牛血清，10%
rNXRN1b Biot Aff Pur PAb (50 UG)細(xì)胞名稱: 猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞；RF/6A RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
rNXRN1b Aff Pur PAb (100 UG)細(xì)胞名稱: 非洲綠猴腎細(xì)胞；CV-1 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清，10%
急性髓性白血病細(xì)胞；KG-1a人硫角質(zhì)素(KS)ELISA試劑盒Lp-PL-A2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人硫類肝素(HS)ELISA試劑盒Lp-PL-A2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人硫皮膚素(DS)ELISA試劑盒LPSELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人硫軟骨素(CS)ELISA試劑盒Lptn/LTNELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人尿游離(UFC)ELISA試劑盒Lptn/LTNELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人葡萄糖6磷異構(gòu)酶(GPI)ELISA試劑盒Lptn/LTNELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人前列環(huán)素(PGI)ELISA試劑盒Lp-αELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人鞘磷脂(SM)ELISA試劑盒Lp-αELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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