實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；PA317 | 貼壁生長 | EY-X63413 |
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細(xì)胞名稱 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；PA317
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: PA317細(xì)胞株源自TK-NIH/3T3細(xì)胞，通過pBR322中的包裝結(jié)構(gòu)DNA(pPAM3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉(zhuǎn)染構(gòu)建而成。通過感染或轉(zhuǎn)染將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入這些細(xì)胞，生成可以感染許多哺乳動物細(xì)胞的雙嗜性載體顆粒。這株細(xì)胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因?qū)肴梭w。可能因?yàn)檗D(zhuǎn)入DNA丟失，能夠包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的PA317細(xì)胞百分比隨傳代而減少。在含0.03mM次黃嘌呤,0.001mM氨甲喋呤和0.02mM胸苷的培養(yǎng)基中短暫(大約5天)選擇，可以選出保留了包裝功能的細(xì)胞。選擇后
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:10傳代,5~10天一次，2~3天換液1次
傳代情況: C3
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
雜交瘤細(xì)胞株；1C81B9形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長APC標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM
倉鼠腎細(xì)胞；BHK/slam/v形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM
雜交瘤細(xì)胞株；TSCD3-77B2形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-CENPA Polyclonal Antibody
人肝癌細(xì)胞系；HCC7706B1HumanliverHCC7706B1形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Anti-CCK Polyclonal Antibody
雜交瘤細(xì)胞株；HBcAb-12E4形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-MMTAG2 Polyclonal Antibody
雜交瘤細(xì)胞株；RVAb-2形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-POMC Polyclonal Antibody
樹鼩肝細(xì)胞永生化細(xì)胞系；ITH6.1形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc
人唾液腺腺樣囊性癌癌相關(guān)成纖維細(xì)胞系；CAF-SA形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Anti-CBX5 Polyclonal Antibody
非洲綠猴腎細(xì)胞；Vero/Slam/V形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-YWHAH Polyclonal Antibody
雜交瘤細(xì)胞株；RVAb-1形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-YWHAG Polyclonal Antibody
豬支氣管上皮細(xì)胞系；hTERT-PBEC形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-TCEAL3 Polyclonal Antibody
雜交瘤細(xì)胞株；1F2D2形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗雞IgG
雜交瘤細(xì)胞株；5A9B8形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG
雜交瘤細(xì)胞株；8H3C4形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗牛IgM
雜交瘤細(xì)胞株；4A-1G7形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗小鼠IgM
雜交瘤細(xì)胞株；F112形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-RFPL4B Polyclonal Antibody
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；PA317兔子腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒IFI16/p16ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔原片段F1+2(F1+2)ELISA試劑盒IFI16/p16ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA試劑盒IFI16/p16ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔子白介素9(IL-9)ELISA試劑盒IFI16/p16ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔子白介素1可溶性受體I(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒IFN-α/βRELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔子D二聚體(D2D)ELISA試劑盒IFNα-AbELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒IFN-αELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒IFN-αELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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