改良安卡拉痘苗病毒PCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)方法
改良安卡拉痘苗病毒PCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)方法：?
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br />探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積yibing醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%yi醇(75%yi醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分yi醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒G亞群RT-LAMP試劑盒
Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒H亞群RT-LAMP試劑盒
Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒I亞群RT-LAMP試劑盒
Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒J亞群RT-LAMP試劑盒
Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒K亞群RT-LAMP試劑盒
Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒通用RT-LAMP試劑盒
Avian Metapneumovirus(aMPV)禽偏肺病毒RT-LAMP試劑盒
Avian Mycoplasma spp.禽類(lèi)支原體通用LAMP試劑盒
Avian Myelocytoma Virus(AMV)鳥(niǎo)類(lèi)髓細(xì)胞瘤病毒RT-LAMP試劑盒
Avian Nephritis Virus 1(ANV-1)禽腎炎病毒1型RT-LAMP試劑盒
Avian Nephritis Virus 2(ANV-2)禽腎炎病毒2型RT-LAMP試劑盒
Avian Nephritis Virus(ANV)禽腎炎病毒通用RT-LAMP試劑盒
Avian Orthoreovirus禽正呼腸孤病毒RT-LAMP試劑盒
Avian Paramyxovirus (APMV)禽副粘病毒通用RT-LAMP試劑盒
Avian Paramyxovirus 1(APMV)禽副粘病毒1型RT-LAMP試劑盒
Avian Paramyxovirus 2(APMV)禽副粘病毒2型RT-LAMP試劑盒
Avian Paramyxovirus 3(APMV)禽副粘病毒3型RT-LAMP試劑盒
Avian Paramyxovirus 4(APMV)禽副粘病毒4型RT-LAMP試劑盒
Avian Pathogenicity Escherichia coli(APEC) 禽致病性大腸桿菌（大腸埃希氏菌）O1血清型LAMP試劑盒
Avian Pneumovirus(APV)禽肺病毒RT-LAMP試劑盒
Avian Polyomavirus(APV)鳥(niǎo)類(lèi)多瘤病毒LAMP試劑盒
Avian Pox virus(APV)禽痘病毒LAMP試劑盒
Avian Reovirus(ARV)禽呼腸孤病毒RT-LAMP試劑盒
上一篇 錦鯉皰疹病毒PCR檢測(cè)試劑盒使用注意說(shuō)明 下一篇 羊肺腺瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒反應(yīng)特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)
會(huì)員_a.png)